1. 病毒悬液制备


1.1 将斜纹夜蛾核型多角体病毒材料加适量蒸馏水置研钵中研磨,加水稀释并通过两层纱布过滤,再将滤液离心(3000 r/min 离心 30 min)。


1.2 将离心后的沉淀物用蒸馏水悬浮,并再离心,这样反复多次,即可得到初部提纯的白色多角体。


1.3 将提纯的多角体先用适量的蒸馏水均匀悬浮,并用血细胞计数板计数,然后再加水使稀释成每毫升含 1×108 个多角体的悬液。


1.4 向上述悬液中加入每毫升含青、链霉素各 1500~2000 单位,以防止杂菌污染。


2. 接种


2.1 将由田间采来的健康三龄斜纹夜蛾幼虫放于玻璃缸内,缸口用多层纱布盖好。虫口密度一般在 33 mm2 一头左右为宜。


2.2 用 1% 的漂白粉液或 5% 石灰水浸泡蓖麻或甘薯叶片进行消毒,然后再用清水洗涤,晾干后,用上述核型多角体悬液浸泡或用蘸有多角体悬液的棉球涂抹,晾干。


2.3 待幼虫经短时间的饥饿以后,将晾干的带毒叶片放于玻璃缸内供食,通过幼虫口食接种病毒。供食带毒叶片的次数可为 1~3 次,一般供毒次数多则发病率高。盖好纱布后,置 30℃ 温室培养。


2.4 培养过程仍需喂食,加强管理与观察。


3. 收获与保存


3.1 在幼虫死亡前,虫体变白,通过皮肤看到血液混浊时,在尾角或腹脚处剪破,收获脓汁,保存于甘油水溶液(水:甘油=1:2)中,置冰箱保存。


3.2 或将脓汁经洗涤、离心,取多角体沉淀加乳糖制成糊状,冷冻干燥保存。


3.3 若整个死虫保存,则将未放出脓汁的病死虫直接放甘油水溶液中,冰箱保存。


4. 涂片镜检


4.1 从尾角或腹脚取血涂片,加上盖玻片。


4.2 于(600×)高倍镜下观察。








病毒培养(昆虫细胞培养)


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